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                            qPCR實驗結果分析基本步驟(二)

                            發布時間: 2021-10-15  點擊次數: 5363次

                            閾值,我們在操作軟件時上下拉動的橫線,是決定Ct值的因素之一。


                            閾值是熒光信號相對于基線有顯著增強的點,大多數儀器會根據基線平均信號,自動計算熒光信號的閾值水平,并設置一個比平均值高10倍的閾值。


                            也就是說,當基線被正確的設置了,閾值也能手動調整成正確值。

                            qPCR實驗結果分析基本步驟(二)

                            需要注意的是:


                            1、讀取閾值相關的分析數據時,不能隨意改變閾值的設置。只有分析不同樣本,或相同樣本不同靶基因時,才能調整閾值。


                            2、設置閾值線時,要在擴增曲線的指數擴增區域內設置,不能在起始階段,也不能在熒光背景(基線)區域。


                            3、每次改變閾值時,要查看標準曲線的斜率和R的平方有沒有改善。沒有使用標準曲線時,也可以計算3個復孔(相同條件擴增的樣本)的標準偏差。好的閾值應該要改善Ct值的表現。


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