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                            上海中科院藥物所高效轉染BV-2小鼠膠質瘤細胞的操作方法

                            發布時間: 2021-11-12  點擊次數: 3044次

                            上海中科院藥物所,使用zeta life公司Advanced DNA RNA轉染試劑成功轉染BV-2小鼠膠質瘤細胞,其轉染條件和操作方法分享如下:


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                            一、轉染條件:

                            細胞密度:60左右

                            質粒DNA濃度:700ng/ul

                            質粒DNA大?。?500bp

                            培養板:24孔板

                            轉染試劑用量:電訊

                            質粒DNA用量:電訊

                            轉染時間:48小時


                            二、操作方法:

                            提前 1 天接種細胞:細胞匯合度在 60-80%左右,再進行轉染。

                            核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照 1:1 關系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

                            在細胞培養基中加入核酸復合物:根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養基 里面可以含有血清。

                            細胞換液:轉染 24 小時后對細胞進行正常換液,懸浮細胞轉染過程中不用換液。

                            分析結果:質粒 DNA 轉染 48-72 小時后熒光檢測轉染效率,48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進行穩定表達細胞株的篩選,則在轉染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉染后 9 小時熒光檢測轉染效率,48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。


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