銷售熱線

                          19126518388
                          • 技術文章ARTICLE

                            您當前的位置:首頁 > 技術文章 > 大鼠大腦皮層神經元細胞培養實驗——酶消化法

                            大鼠大腦皮層神經元細胞培養實驗——酶消化法

                            發布時間: 2021-12-05  點擊次數: 1694次

                            材料與儀器

                            小鼠
                            酒精 解剖液 胰蛋白酶 DMEM F12 B27 阿糖胞苷培養液
                            培養箱

                            步驟


                            一、小鼠大腦皮層神經元原代培養步驟

                            1.  于無菌條件下切取鼠頭并以75%酒精浸泡1 min,解剖出完整鼠腦。

                            2.  預冷解剖液中分離去除軟膜、血管、取大腦皮質漂洗,用眼科剪將皮質反復剪切成碎塊。

                            3.  移入培養皿中,吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2 ml,37℃培養箱中消化30 min。

                            4.  將皮層組織碎塊移入離心管,棄去剩余消化液,用接種液洗3次,每次洗滌后使組織塊充分沉降到試管底,棄去上清液。

                            5.  最后再用接種液1 ml混懸,反復吹打(巴氏吸管)混懸液中組織塊,力度適中,至渾濁后將上清液移入培養瓶待用。

                            6.  加入1ml接種液后再次吹打,如此反復3-4次,組織塊逐漸消化后,棄去最終殘塊。

                            7.  收集含單細胞懸液的上清液約4-5 ml于培養瓶中,以接種液重新懸浮細胞,細胞記數;接種1x107個細胞于6孔培養板中。

                            8.  培養24 h至細胞貼壁后,換全培養液(DMEM/F12+2%B27)培養3d,觀察神經元生長狀況。

                            9.  換用阿糖胞苷培養液、  每隔3d換全培養液1次,每次換半液。

                            二、神經元免疫化學鑒定

                            1.  4%多聚甲醛固定細胞30 min,PBS洗滌3次。

                            2.  加入無水甲醇:30%雙氧水(5:1)處理30 min,PBS洗滌3次。

                            3.  加入5%羊血清封閉20 min,棄去多余液體。

                            4.  加入Rabbit Anti-NSE(1:100)(神經元特異性烯醇化酶),培養箱中孵育2-4 h,PBS洗滌3次。

                            6.  加入DAPI染液(1:40),室溫放置5-10 min;PBS洗滌3次。

                            7.  熒光顯微鏡觀察。 

                            三、結果      


                            圖1: 剛接種時細胞圖

                            圖2: 剛接種時細胞圖培養1d后

                            圖3: 剛接種時細胞圖培養2d后

                            圖4: 剛接種時細胞圖培養3d后

                            圖5: 剛接種時細胞圖培養4d后


                            圖6: 剛接種時細胞圖培養5d后


                            圖7: 剛接種時細胞圖培養6d后


                            圖8:第7d免疫鑒定圖


                          產品中心 Products
                          图片小说亚洲中文字幕|国产真人一级a爱做片无码|国产91最新欧美在线|国产日韩欧美综合