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                            懸浮細胞培養的方法

                            發布時間: 2022-10-20  點擊次數: 1830次

                            材料與儀器


                            凍存 HeLa S3 細胞
                            70% 乙醇 * MEM-10 胰酶/EDTA
                            旋轉瓶*培養基-5 25 cm2 組織培養瓶 C02 培養箱 Sorvall H-6000A 轉子 100 ml 或 200 ml 通氣旋轉瓶和帶濾膜的瓶蓋


                            步驟


                            1. 將含有凍存 HeLa S3 細胞的安瓿放入 37℃ 水浴中解凍。

                            2. 用 70% 乙醇對安瓿的頂端進行消毒,打開安瓿,用吸管將細胞轉移到含有 5 ml * MEM-10 培養基的 25 cm2 組織培養瓶中,輕輕搖動培養瓶,使細胞均勻分布于培養瓶中,放入 5% CO2 加濕培養箱中 37℃ 培養過夜。

                            3. 將培養基吸出,用 0.5 ml 37℃ 的胰酶/EDTA 覆蓋細胞,消化 30~40 s。

                            4. 加入 10 ml 旋轉瓶*培養基-5,并將細胞轉移至 50 ml 的離心管中。室溫 1800 g 離心 5 min,棄上清。

                            5. 將細胞沉淀懸浮在 5 ml 的旋轉瓶*培養基-5 中,上下吹打,將細胞團打散。

                            6. 在 100 ml 或 200 ml 通氣旋轉瓶中加入 50 ml 旋轉瓶*培養基-5,并將細胞懸液轉移到瓶中。

                            7. 取出 1 ml 細胞懸液,用血細胞計數器(附錄 3F) 進行細胞計數。加入適量的旋轉瓶*培養基-5,使細胞密度為(3~4)× 105 細胞/ml。將細胞放入無 CO2 培養箱,37℃ 旋轉培養。

                            8. 隨后的兩天讓細胞繼續生長,并且每天對細胞進行計數,加入適量的旋轉瓶*培養基-5 以維持(3~4)×105 細胞/ml 的細胞密度。

                            9. 取 1 ml 的細胞懸液,用血細胞計數器對細胞進行監測。

                            10. 當細胞密度達到(4~5)×105 細胞/ml 時,隔天或每天用培養基將細胞稀釋至 1.5×105 或 2.5×105 細胞/ml。

                            11. 分別將裝有 50 ml 或 100 ml 細胞懸液的 100 ml 或 200 ml 通氣旋轉瓶放入 37℃ 無 CO2 培養箱旋轉培養。每天或隔天傳代。


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