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                            乙醇沉淀法

                            發布時間: 2021-12-17  點擊次數: 5150次

                            原理

                            DNA 溶液是DNA以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混 合,其乙醇的最終含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇來替代懈水乙醇(因為無水乙醇的價格遠遠比95%乙醇昂貴)。但是加95%的乙醇使總體積增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,尤其用多次乙醇沉淀時,就會影響收得率。折中的做法初次沉淀DNA時可用95%乙醇代替無水乙醇,最后的沉淀步驟要使用無水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA.一般在室溫下放置15-30分鐘即可。

                            材料與儀器

                            DNA
                            乙酸鈉 乙醇
                            EP管 低溫離心機 移液器 -70度冰箱

                            步驟


                            1. 酶切前確定待切樣品的濃度, 并選擇合適的限制性內切酶和配套Buffer。
                             
                            2. 在離心管中加入如下成分:
                            10xBuffer   1ul
                            待切樣品   xul
                            酶      0.5-1ul
                            ______________________
                            加水補足10ul
                             
                            3. 混勻樣品并短暫離心使樣品沉于管底。
                             
                            4. 將離心管置于37℃中溫育1-3hr,若待切樣品為PCR 產物,則可將反應時間適當延長。
                             
                            5. 用未酶切的質粒作為對照,瓊脂糖電泳鑒定酶切結果。
                             
                            注:當酶切樣品用于回收而不是鑒定時,可按比例適當加大反應體積。雙酶切可選用二者活性都較高的Buffer 或者通用Buffer,但要注意不能有星反應。


                            注意事項

                            移去上清液時需要緩慢操作,以免將DNA樣品弄出。

                            常見問題

                            乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。

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